สารบัญ:
วีดีโอ: คุณใส่ยีนเข้าไปในพลาสมิดได้อย่างไร?
2024 ผู้เขียน: Stanley Ellington | [email protected]. แก้ไขล่าสุด: 2024-01-18 08:23
ขั้นตอนพื้นฐานคือ:
- ตัดเปิด พลาสมิด และ "วาง" ใน ยีน . กระบวนการนี้อาศัยเอ็นไซม์จำกัด (ซึ่งตัด DNA) และ DNA ligase (ซึ่งรวม DNA)
- แทรก NS พลาสมิดเข้า แบคทีเรีย.
- โตขึ้นเยอะเลย พลาสมิด -เป็นพาหะนำแบคทีเรียและใช้เป็น "โรงงาน" ในการผลิตโปรตีน
นอกจากนี้ ยีนจะถูกแทรกเข้าไปในพลาสมิด GCSE ได้อย่างไร?
มันคือ แทรกเข้าไปในพลาสมิด โดยใช้เอนไซม์ไลเกส NS พลาสมิด ไป เข้าไปข้างใน เซลล์แบคทีเรีย แบคทีเรียแปลงพันธุ์ทำให้เกิดผล ใน แบคทีเรียที่เหมือนกันหลายล้านชนิดที่ผลิตอินซูลินของมนุษย์
นอกจากนี้ คุณจะ Subclone ยีนได้อย่างไร? ขั้นตอนพื้นฐานสำหรับ การโคลนย่อย คุณปล่อยและทำให้เม็ดมีดของคุณบริสุทธิ์จากเวกเตอร์หลัก เชื่อมส่วนแทรกนี้เข้ากับเวกเตอร์ปลายทางที่เตรียมไว้ เปลี่ยนปฏิกิริยา ligation นี้เป็นเซลล์แบคทีเรียที่มีความสามารถ จากนั้นคุณคัดกรองเซลล์ที่แปลงแล้วสำหรับการแทรก
เมื่อพิจารณาตามนี้แล้ว การโคลนยีน 4 ขั้นตอนมีอะไรบ้าง?
ในโปรโตคอลการย่อยของเอ็นไซม์จำกัดแบบคลาสสิกและโปรโตคอลการโคลน ligation การโคลนชิ้นส่วน DNA ใดๆ ที่เกี่ยวข้องโดยพื้นฐานแล้วเกี่ยวข้องกับสี่ขั้นตอน:
- การแยก DNA ที่น่าสนใจ (หรือ DNA เป้าหมาย)
- ligation,
- การถ่ายเท (หรือการแปลง) และ.
- ขั้นตอนการคัดกรอง/คัดเลือก
คุณจะขยายพลาสมิดได้อย่างไร?
ขั้นตอนการทดลอง
- เรียกใช้ PCR และทำให้ผลิตภัณฑ์ PCR บริสุทธิ์: เรียกใช้ PCR เพื่อขยาย DNA ของเม็ดมีดของคุณ
- แยกแยะ DNA ของคุณ:
- แยกส่วนแทรกและเวกเตอร์ของคุณออกโดยการทำให้บริสุทธิ์ด้วยเจล:
- ตรึงส่วนแทรกของคุณลงในเวกเตอร์ของคุณ:
- การเปลี่ยนแปลง:
- แยกพลาสมิดสำเร็จรูป:
- ตรวจสอบ Plasmid ของคุณโดยลำดับ: