การจัดลำดับ DNA ของ Sanger ทำงานอย่างไร
การจัดลำดับ DNA ของ Sanger ทำงานอย่างไร

วีดีโอ: การจัดลำดับ DNA ของ Sanger ทำงานอย่างไร

วีดีโอ: การจัดลำดับ DNA ของ Sanger ทำงานอย่างไร
วีดีโอ: 5 ทบทวนความรู้ sanger sequencing 2024, พฤศจิกายน
Anonim

ลำดับแซงเจอร์ ส่งผลให้เกิดการต่อขยายผลิตภัณฑ์ความยาวต่างๆ ที่สิ้นสุดด้วยไดดีออกซีนิวคลีโอไทด์ที่ปลาย 3' ผลิตภัณฑ์ต่อขยายจะถูกคั่นด้วย Capillary Electrophoresis หรือ CE โมเลกุลถูกฉีดโดยกระแสไฟฟ้าเข้าไปในเส้นเลือดฝอยแก้วยาวที่เต็มไปด้วยเจลโพลีเมอร์

ด้วยวิธีนี้ วิธีการ Sanger ในการจัดลำดับ DNA คืออะไร?

ลำดับแซงเจอร์ เรียกอีกอย่างว่าการยุติลูกโซ่ กระบวนการ เป็นเทคนิคสำหรับ ลำดับดีเอ็นเอ ขึ้นอยู่กับการรวมตัวแบบเลือกสรรของไดดีออกซีนิวคลีโอไทด์ที่ยุติลูกโซ่ (ddNTPs) โดย ดีเอ็นเอ พอลิเมอเรสระหว่างในหลอดทดลอง ดีเอ็นเอ การจำลองแบบ ได้รับการพัฒนาโดย Frederick แซงเกอร์ และเพื่อนร่วมงานในปี 2520

นอกจากนี้ การจัดลำดับการยกเลิกลูกโซ่ทำงานอย่างไร แซงเกอร์ ดีเอ็นเอ ลำดับ ยังเป็นที่รู้จักกันในนาม โซ่ - การเลิกจ้าง วิธีการของ ลำดับ . ddNTPs ส่งผลให้ การเลิกจ้าง ของสาย DNA เนื่องจาก ddNTPs ไม่มีหมู่ 3'-OH ที่จำเป็นสำหรับการสร้างพันธะฟอสโฟไดสเตอร์ระหว่างนิวคลีโอไทด์ หากปราศจากความผูกพันนี้ โซ่ ของนิวคลีโอไทด์ที่ก่อตัวขึ้นคือ สิ้นสุด.

พูดง่ายๆ ก็คือ เหตุใดเราจึงทำการจัดลำดับ Sanger

การจัดลำดับแซงเกอร์คือ NS กระบวนการ ของ ลำดับดีเอ็นเอ ขึ้นอยู่กับการรวมตัวแบบคัดเลือกของไดดีออกซีนิวคลีโอไทด์ที่ยุติลูกโซ่โดย ดีเอ็นเอ พอลิเมอเรสระหว่างในหลอดทดลอง ดีเอ็นเอ การจำลองแบบ ก็ยังได้เปรียบกว่าการอ่านระยะสั้น ลำดับ เทคโนโลยี (เช่น Illumina) ที่มัน สามารถ ผลิต ลำดับดีเอ็นเอ อ่านค่า > 500 นิวคลีโอไทด์

การจัดลำดับ Sanger นั้นแม่นยำหรือไม่?

ลำดับแซงเจอร์ ด้วย 99.99% ความแม่นยำ เป็น “มาตรฐานทองคำ” สำหรับการวิจัยทางคลินิก ลำดับ . อย่างไรก็ตาม เทคโนโลยี NGS ที่ใหม่กว่าก็กลายเป็นเรื่องธรรมดาในห้องปฏิบัติการวิจัยทางคลินิกเนื่องจากความสามารถในการรับส่งข้อมูลที่สูงขึ้นและต้นทุนต่อตัวอย่างที่ต่ำลง

แนะนำ: