วีดีโอ: การจัดลำดับ Sanger มีความแม่นยำเพียงใด?
2024 ผู้เขียน: Stanley Ellington | [email protected]. แก้ไขล่าสุด: 2023-12-16 00:24
ลำดับแซงเจอร์ ด้วย 99.99% ความแม่นยำ เป็น “มาตรฐานทองคำ” สำหรับการวิจัยทางคลินิก ลำดับ . อย่างไรก็ตาม เทคโนโลยี NGS ที่ใหม่กว่าก็กลายเป็นเรื่องธรรมดาในห้องปฏิบัติการวิจัยทางคลินิกเนื่องจากความสามารถในการรับส่งข้อมูลที่สูงขึ้นและต้นทุนต่อตัวอย่างที่ต่ำลง
ยังถามอีกว่าทำไม NGS ถึงดีกว่าแซงเจอร์?
แซงเกอร์ การจัดลำดับสามารถจัดลำดับได้ครั้งละหนึ่งส่วนเท่านั้น เพราะ NGS ใช้โฟลว์เซลล์ที่สามารถจับ DNA ได้หลายล้านชิ้น NGS สามารถอ่านลำดับทั้งหมดนี้ได้ในเวลาเดียวกัน คุณลักษณะปริมาณงานสูงนี้ทำให้คุ้มค่ามากเมื่อต้องจัดลำดับ DNA จำนวนมาก
นอกจากนี้ จุดประสงค์ของการจัดลำดับ Sanger คืออะไร? ลำดับแซงเจอร์ เป็นกระบวนการคัดเลือกการรวมตัวของไดดีออกซีนิวคลีโอไทด์ที่ปลายลูกโซ่ด้วยดีเอ็นเอโพลีเมอเรสระหว่างการจำลองดีเอ็นเอในหลอดทดลอง เป็นวิธีที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในการตรวจจับ SNV
ต่อมา อาจมีคนถามว่า การจัดลำดับ Sanger และการจัดลำดับรุ่นต่อไปแตกต่างกันอย่างไร
ต่อไป - ลำดับรุ่น (NGS) เทคโนโลยีมีความคล้ายคลึงกัน ที่สำคัญ ความแตกต่างระหว่างการจัดลำดับ Sanger และ NGS คือ ลำดับ ปริมาณ. ในขณะที่ แซงเกอร์ วิธีเท่านั้น ลำดับ ชิ้นส่วน DNA ทีละชิ้น NGS ขนานกันอย่างหนาแน่น ลำดับ ชิ้นส่วนนับล้านพร้อมกันต่อการรัน
การจัดลำดับการยุติลูกโซ่ทำงานอย่างไร
แซงเกอร์ ดีเอ็นเอ ลำดับ ยังเป็นที่รู้จักกันในนาม โซ่ - การเลิกจ้าง วิธีการของ ลำดับ . ddNTPs ส่งผลให้ การเลิกจ้าง ของสาย DNA เนื่องจาก ddNTPs ไม่มีหมู่ 3'-OH ที่จำเป็นสำหรับการสร้างพันธะฟอสโฟไดสเตอร์ระหว่างนิวคลีโอไทด์ หากปราศจากความผูกพันนี้ โซ่ ของนิวคลีโอไทด์ที่ก่อตัวขึ้นคือ สิ้นสุด.
แนะนำ:
การจัดลำดับ DNA ของ Sanger ทำงานอย่างไร
การจัดลำดับแซงเจอร์ส่งผลให้เกิดผลิตภัณฑ์ส่วนขยายที่มีความยาวต่างๆ ที่สิ้นสุดด้วยไดดีออกซีนิวคลีโอไทด์ที่ปลาย 3' ผลิตภัณฑ์ต่อขยายจะถูกคั่นด้วย Capillary Electrophoresis หรือ CE โมเลกุลถูกฉีดโดยกระแสไฟฟ้าเข้าไปในเส้นเลือดฝอยแก้วยาวที่เต็มไปด้วยเจลโพลีเมอร์
เหตุใดเราจึงใช้การจัดลำดับ Sanger
การจัดลำดับ Sanger เป็นแนวทางที่มีประสิทธิภาพสำหรับการศึกษาการคัดกรองแบบแปรผันเมื่อจำนวนตัวอย่างทั้งหมดต่ำ สำหรับการศึกษาการคัดกรองตัวแปรที่จำนวนตัวอย่างสูง การจัดลำดับแอมพลิคอนด้วย NGS จะมีประสิทธิภาพและคุ้มทุนมากกว่า
อะไรคือความแตกต่างระหว่างการจัดลำดับ Sanger และการจัดลำดับรุ่นต่อไป?
เทคโนโลยีการจัดลำดับยุคหน้า (NGS) มีความคล้ายคลึงกัน ความแตกต่างที่สำคัญระหว่าง Sangersequencing และ NGS คือการจัดลำดับปริมาณ ในขณะที่วิธี Sanger จะจัดลำดับชิ้นส่วน DNA เพียงชิ้นเดียวในแต่ละครั้ง NGS จะขนานกันอย่างหนาแน่น โดยจัดลำดับชิ้นส่วนหลายล้านชิ้นพร้อมกันต่อการรัน