จุดประสงค์ของการใช้ ddNTP คืออะไร?

2024 ผู้เขียน: Stanley Ellington | [email protected]. แก้ไขล่าสุด: 2023-12-16 00:24

DdNTP อ้างถึง ไดดีออกซีนิวคลีโอไทด์ ไตรฟอสเฟตที่ใช้ในวิธี Sanger dideoxy เพื่อผลิตสาย DNA ที่มีความยาวต่างกันสำหรับการจัดลำดับ DNA ส่งผลให้เกิดการยุติกระบวนการพอลิเมอไรเซชันของ DNA (หรือการยืดตัวของ DNA) เนื่องจากกระบวนการนี้ต้องการกลุ่ม 3'-OH เพื่อดำเนินการต่อ

เหตุใดจึงใช้ ddNTP ในการจัดลำดับ

ไดดีออกซีนิวคลีโอไทด์ เป็นตัวยับยั้งการยืดตัวของสายโซ่ของ DNA polymerase ใช้แล้ว ในวิธี Sanger สำหรับ DNA ลำดับ . ไดดีออกซีไรโบนิวคลีโอไทด์ไม่มีหมู่ไฮดรอกซิล 3' ดังนั้นจึงไม่มีการยืดตัวของสายต่อไปได้อีกเมื่อไดดีออกซีนิวคลีโอไทด์นี้อยู่บนสายโซ่ นี้สามารถนำไปสู่การสิ้นสุดของดีเอ็นเอ ลำดับ.

ddNTPs เชื่อมต่อกับ dNTP ในลักษณะเดียวกันหรือไม่ หนึ่งหรือมากกว่าของ dNTPs ติดฉลากกัมมันตภาพรังสีเพื่อช่วยให้เห็นภาพผลิตภัณฑ์การจำลองแบบ ในที่สุด แต่ละหลอดจะได้รับนิวคลีโอไทด์พิเศษหนึ่งในสี่ที่เรียกว่า ไดดีออกซีนิวคลีโอไทด์ ( ddNTPs ). อย่างไรก็ตาม เมื่อรวมเข้าด้วยกันแล้ว DNA polymerase จะไม่สามารถขยายสายโซ่ออกไปได้อีก เนื่องจากมันต้องการ 3'-OH to แนบ สู่นิวคลีโอไทด์ถัดไป

ในทำนองเดียวกันอาจมีคนถามว่า ddNTP จะหยุดปฏิกิริยาการจัดลำดับได้อย่างไร

เมื่อมีอยู่ในปริมาณเล็กน้อยใน ปฏิกิริยาการเรียงลำดับ , ไดดีออกซีไรโบนิวคลีโอไซด์ ไตรฟอสเฟต ( ddNTPs ) ยุติ ปฏิกิริยาการเรียงลำดับ ที่ตำแหน่งต่าง ๆ ในสาย DNA ที่กำลังเติบโต ddNTPs หยุดปฏิกิริยาการเรียงลำดับ เพราะพวกเขา: ทำให้ DNA polymerase หลุดออกจากเส้นแม่แบบ ค.

เทคนิคใดที่เกี่ยวข้องกับ Dideoxynucleotides ที่สามารถใช้ได้?

การจัดลำดับแซงเจอร์คือ a กระบวนการ ของการจัดลำดับดีเอ็นเอตามการรวมตัวแบบคัดเลือกของการยุติลูกโซ่ ไดดีออกซีนิวคลีโอไทด์ โดย DNA polymerase ระหว่างการจำลอง DNA ในหลอดทดลอง พัฒนาโดย Frederick Sanger และเพื่อนร่วมงานในปี 1977 เป็นเกมที่แพร่หลายที่สุด ใช้แล้ว ลำดับ กระบวนการ เป็นเวลาประมาณ 40 ปี