คุณสามารถจัดลำดับผลิตภัณฑ์ PCR ได้หรือไม่?

2024 ผู้เขียน: Stanley Ellington | [email protected]. แก้ไขล่าสุด: 2023-12-16 00:24

โดยตรง ลำดับ ของ ผลิตภัณฑ์ PCR . ค่อนข้างเป็นไปได้โดยตรง ลำดับ NS ผลิตภัณฑ์ PCR โดยไม่ต้องโคลนแฟรกเมนต์ก่อน โดยตรง การจัดลำดับ PCR ไม่ค่อยประสบความสำเร็จเว้นแต่ คุณ ใช้เวลาบางส่วนเพื่อให้แน่ใจว่า คุณ ไม่ได้ตกอยู่ใน หนึ่ง จากกับดักมากมาย

ในลักษณะนี้ การหาลำดับ PCR คืออะไร?

โดยตรง ลำดับ ของ PCR สินค้า. คุณต้องลบทั้งหมด PCR ไพรเมอร์และนิวคลีโอไทด์ที่ไม่ถูกรวมเข้าด้วยกันก่อนที่ผลิตภัณฑ์จะเป็น ลำดับ . ลำดับ ใช้ไพรเมอร์เพียงตัวเดียวแทนสองสีที่ใช้ใน PCR . ถ้าคุณไม่ถอดไพรเมอร์ทั้งสองออก คุณจะได้สองตัว ลำดับ ซ้อนทับกันซึ่งไม่สามารถอ่านได้

ในทำนองเดียวกัน ฉันสามารถใช้ไพรเมอร์ PCR เพื่อจัดลำดับได้หรือไม่ ไพรเมอร์ PCR มีไว้สำหรับ PCR การขยายเพื่อให้ได้แอมพลิคอน ไพรเมอร์ลำดับ เป็น ใช้แล้ว ถึง ลำดับ ชิ้นส่วนดีเอ็นเอและเผยให้เห็นดีเอ็นเอของมัน ลำดับ แยกแยะ. 4. สอง ไพรเมอร์ PCR มีความจำเป็นใน a PCR ปฏิกิริยา (โดยปกติ); หนึ่งเดียว ไพรเมอร์ลำดับ ถูกเพิ่มใน a ลำดับ ปฏิกิริยา.

เมื่อพิจารณาถึงสิ่งนี้ คุณจะทดสอบผลิตภัณฑ์ PCR อย่างไร

การตรวจจับและวิเคราะห์ ผลิตภัณฑ์ PCR . NS ผลิตภัณฑ์ ของ PCR ควรเป็นชิ้นส่วนหรือชิ้นส่วนของ DNA ที่มีความยาวที่กำหนด สามารถใช้เทคนิคมากมายในการตรวจจับลำดับที่ขยาย (ดูตาราง) เทคนิคที่ง่ายที่สุดและใช้กันทั่วไปคืออิเล็กโตรโฟรีซิสของ ผลิตภัณฑ์ PCR บนเจลอากาโรสที่มี EtBr (เอทิเดียมโบรไมด์)

เหตุใดจึงจำเป็นต้องทำให้ผลิตภัณฑ์ PCR บริสุทธิ์ก่อนจัดลำดับ

การทำให้บริสุทธิ์ ของ DNA จาก a PCR ปฏิกิริยามักจะ จำเป็นสำหรับ การใช้งานปลายน้ำ และอำนวยความสะดวกในการกำจัดเอ็นไซม์ นิวคลีโอไทด์ ไพรเมอร์ และส่วนประกอบบัฟเฟอร์