เหตุใดจึงจำเป็นต้องทำให้ผลิตภัณฑ์ PCR บริสุทธิ์ก่อนจัดลำดับ

2024 ผู้เขียน: Stanley Ellington | [email protected]. แก้ไขล่าสุด: 2023-12-16 00:24

การตรวจสอบที่ต้องการ ผลิตภัณฑ์ เป็น จำเป็น ซึ่งรวมถึงการยืนยันการขาดไม่เฉพาะเจาะจง สินค้า และไพรเมอร์ไดเมอร์ ทำความสะอาด - ขึ้นของส่วนผสมของปฏิกิริยาก็เช่นกัน จำเป็น เพื่อขจัดไพรเมอร์และ dNTP ที่ไม่ถูกรวมออกซึ่งอาจรบกวนปฏิกิริยาที่ตามมาและนำไปสู่ลำดับที่อ่านไม่ได้

นอกจากนี้ เหตุใดจึงจำเป็นต้องทำให้ผลิตภัณฑ์ PCR บริสุทธิ์

คุณต้อง ทำความสะอาดผลิตภัณฑ์ PCR เพื่อกำจัดไพรเมอร์ นิวคลีโอไทด์ และเอ็นไซม์ที่ไม่ได้ใช้ เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพความสำเร็จของ ligation ซึ่งจะรักษาและจัดลำดับ ผลิตภัณฑ์ ของ PCR . ถึง ชำระล้าง NS ผลิตภัณฑ์ PCR , ใช้โครมาโตกราฟีแบบยกเว้นขนาด

อาจมีคนถามว่า คุณควรทำให้ผลิตภัณฑ์ PCR บริสุทธิ์ก่อนที่จะจำกัดการย่อยเอนโดนิวคลีเอสหรือไม่? ส่วนใหญ่ของ ข้อจำกัด เอ็นไซม์ออกฤทธิ์ใน PCR บัฟเฟอร์ สำหรับการโคลนแอพพลิเคชั่น การทำให้บริสุทธิ์ ของ ผลิตภัณฑ์ PCR ก่อนย่อย เป็น จำเป็น เพื่อขจัด DNA polymerase ของ thermophilic ที่ใช้งานอยู่ใน PCR ส่วนผสม DNA polymerase อาจเปลี่ยนแปลงส่วนปลายของ DNA ที่แยกออก และลดผลผลิตของ ligation

ผู้คนยังถามคุณว่า คุณเตรียมผลิตภัณฑ์ PCR สำหรับการจัดลำดับอย่างไร?

การจัดลำดับโดยตรงของผลิตภัณฑ์ PCR

1. ตรวจสอบให้แน่ใจว่าคุณขยายส่วนที่ถูกต้อง
2. คุณต้องลบไพรเมอร์ PCR ที่เหลือและนิวคลีโอไทด์ที่ไม่ได้รวมออกทั้งหมด
3. หากไพรเมอร์ PCR จะเป็นไพรเมอร์สำหรับการจัดลำดับด้วย ตรวจสอบให้แน่ใจว่าไพรเมอร์ตรงกับเงื่อนไขของเรา
4. อย่าเน้นตัวอย่างมากเกินไป!

คุณสามารถจัดลำดับผลิตภัณฑ์ PCR ได้หรือไม่?

โดยตรง ลำดับ ของ ผลิตภัณฑ์ PCR . ลำดับ ใช้เท่านั้น หนึ่ง ไพรเมอร์แทนสองที่ใช้ใน PCR . ถ้าคุณทำ ไม่ลบไพรเมอร์ทั้งสอง คุณจะ รับสอง ลำดับ ซ้อนทับกันซึ่งไม่สามารถอ่านได้ ใช้ a. ได้ PCR ไพรเมอร์สำหรับ ลำดับ ตราบเท่าที่ตรงกับเงื่อนไขของเรา